Оплодотворение в пробирке

Искусственное оплодотворение - это современный и эффективный метод лечения бесплодия, применяемый в тех случаях, когда зачатие естественным путем невозможно. В настоящее время существуют различные способы искусственного оплодотворения и вспомогательных репродуктивных технологий, позволяющие нам помочь огромному числу бездетных пар добиться желаемого результата.

1. Искусственная инсеминация
2. Экстракорпоральное оплодотворение - ЭКО
3. Отбор бластоцистов
4. ИКСИ
5. ИМСИ
6. Специальные техники
7. Криоконсервация - метод глубокой заморозки

Приоритетная цель репродуктивной медицины состоит в том, чтобы, несмотря на неутешительный диагноз, помочь супружеской паре достичь долгожданной беременности!

Максимальный успех лечения бесплодия с помощью такого метода, как искусственное оплодотворение возможен лишь при стремлении к идеальному качеству услуг и соблюдению всех необходимых правил, начиная с оптимальной подготовки к лечению, выбора наиболее приемлемой тактики терапии и гормональной стимуляции, применения эффективных техник пункции фолликула / яйцеклетки, профессиональной лабораторной обработки генетического материала, включая отбор бластоцистов и ИМСИ, трансфер эмбриона и последующий контроль за состоянием пациентки во время беременности.

Как возраст женщины влияет на ее шансы забеременеть?

С возрастом существенно снижаются шансы забеременеть не только естественным путем, но и при помощи вспомогательных репродуктивных технологий. Кроме возраста женщины имеется и множество других факторов, оказывающих влияние на успешный исход процедуры. К ним относятся:

• неправильно подобранное медикаментозное лечение при нарушении гормонального фона
• эндометриоз
• аномалии развития матки
• доброкачественные новообразования матки
• и проч.

1. Искусственная инсеминация

Искусственная инсеминация - это одна из методик лечения бесплодия, которая может быть рекомендована преимущественно женщинам молодого возраста (до 36 лет) в качестве первой терапевтической опции, включающей в себя от 3 до 6 циклов. Согласно критериям Всемирной организации здравоохранения, главными условиями для выполнения искусственной интраутеринной инсеминации является проходимость яичников женщины и хорошие результаты спермограммы партнера.

Основным показанием к осуществлению данной методики является синдром поликистозных яичников женщины, препятствующий наступлению беременности. Для получения 1 или 2 зрелых фолликулов пациентке вводят гормональные препараты (гонадотропин, кломифен). При помощи гормона ХГЧ (хорионического гонадотропина человека) провоцируется выход яйцеклетки из фолликула, после чего предварительно обработанные сперматозоиды партнера вводят в полость матки женщины. Как правило, собственно процесс оплодотворения происходит в верхнем отделе фаллопиевой трубы.

Путь оплодотворенной яйцеклетки (зиготы) из маточной трубы до полости матки длится 5 дней. Оплодотворенная яйцеклетка в стадии бластоцисты достигает полости матки и начинает прикрепляться к ее стенке.

Чтобы эмбрион надежно прикрепился, предварительно выполняется тщательная подготовка эндометрия (слизистой оболочки матки) при помощи определенных гормональных препаратов, например прогестерона.

2. Экстракорпоральное оплодотворение - ЭКО

Экстракорпоральное оплодотворение - это один из самых передовых методик вспомогательных репродуктивных технологий, который применяется с 1978 года в качестве терапевтической возможности для лечения бездетных пар при непроходимости фаллопиевых труб и различных гормональных нарушениях у женщины, а также азооспермии и плохом качестве сперматозоидов у мужчины.

Изначально термины «оплодотворение в пробирке» и «экстракорпоральное оплодотворение» были введены для обозначения процесса слияния яйцеклетки и сперматозоида вне организма женщины.

Для этого из яичников женщины методом пункции изымаются яйцеклетки, которые затем вместе с семенными клетками партнера помещаются в специальную среду.

Оплодотворение яйцеклетки методом ИКСИ

В течение последующих 2-5 дней развившиеся в результате оплодотворения яйцеклетки эмбрионы переносятся в полость матки (трансфер эмбриона).

Супружеские пары, решившие на искусственное оплодотворение, зачастую сталкиваются с различными психологическими трудностями. Именно по этой причине мы стремимся к созданию доверительной и благоприятной атмосферы на протяжении всего периода лечения.

Наши специалисты предоставят Вам подробную информацию обо всех аспектах имеющихся в нашем арсенале терапевтических возможностей. Для пациентов, которые обращаются в наш центр за получением квалифицированного медицинского обслуживания, будет составлен индивидуальный план лечения с учетом следующих пунктов:

• Результаты тщательного гинекологического обследования женщины
• Результаты спермограммы партнера

Поскольку искусственное оплодотворение почти всегда сопряжено со значительным стрессом, перед началом лечения Вам может быть предложена предварительная психологическая консультация.

После информационной беседы все пациенты получают от нас небольшие брошюрки, содержащие точное описание всех предстоящих процедур (ультразвуковое обследование, определение уровня и соотношения гормонов, анализ крови и т.д.), медикаментозных препаратов и терапевтического плана.

В каждом конкретном случае план лечения подбирается в индивидуальном порядке, с учетом всех особенностей пары.

3. Отбор бластоцистов

После забора яйцеклеток (фолликулярной пункции) с их последующим оплодотворением с помощью методик ЭКО, ИКСИ, ИМСИ эмбрионы помещаются в специальную питательную среду.

Примерно через 16-18 часов осуществляется первый контроль под микроскопом, с помощью которого удается определить сколько яйцеклеток удалось оплодотворить (как показывает практика, оплодотворяется более 70% полученных яйцеклеток).

Инкубационный шкаф и культивирование - посуда для эмбрионов

До 1996 года эмбрионы пересаживались в полость матки (трансфер эмбрионов) обычно на 2-3 день после пункции фолликула в стадии на 4-8-клеточной стадии развития. С развитием новых методик и внедрением высокотехнологичного оснащения лабораторий появилась возможность культивировать эмбрионы в течении более длительного промежутка времени и вводить их в полость матки женщины лишь на 5 (реже на шестой) день после фолликулярной пункции в стадии бластоцистов (как правило, переносится 1-2 эмбриона).

Наши центры репродукции человека и планирования семьи в настоящее время практикуют исключительно трансфер эмбрионов, находящихся на стадии бластоцистов.

3.1. В чем заключается преимущество отбора бластоцистов после искусственного оплодотворения

Длительное культивирование эмбрионов до стадии бластоцисты открывает широкие перспективы при отборе качественных эмбрионов, что играет существенную роль в увеличении шансов на наступление беременности.

С помощью этой техники, используемой в комбинации с ассистированными репродуктивными технологиями, вероятность наступления беременности у женщины детородного возраста может достигать вплоть до 80%. Процент выкидышей составляет 5-10 %, вероятность благополучного вынашивания беременности и рождения здорового ребенка - 70-75%.

Основополагающее направление деятельности наших центров репродукции человека и планирования семьи - это перенос одного эмбриона, поскольку имплантация двух бластоцистов несущественно повышает успех наступления беременности (5-7%) и характеризуется высоким риском развития многоплодной беременности (20-30%).

По Вашему желанию, не использованные в ходе экстракорпорального оплодотворения бластоцисты могут быть заморожены специально разработанной нами техникой витрификации, которая гарантирует высокие шансы выживаемости эмбрионов после их разморозки. При необходимости они могут быть применены для зачатия второго ребенка, а также подвергаться повторной заморозке (криоконсервации).

Доктор Pierre Vanderzwalmen, сотрудничающий с коллегами нашего центра в течении многих лет, считается ведущим экспертом в области криоконсервации эмбрионов, сперматозоидов, яйцеклеток, а также тканей яичка и яичников.

Благодаря его научному труду, нами была разработана новая методика классификации, позволяющая определить состояние бластоцистов после их разморозки, с высокой точностью отобрать наиболее жизнеспособные эмбрионы, и таким образом, повысить результативность процедуры.

3.2. Искусственное оплодотворение: особенности

Главное условия для достижения успеха в сфере репродуктивной медицины - это высокая квалификация врачей и превосходное владение техникой отбора бластоцистов.

4. ИКСИ

ИКСИ, или так называемая интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида применяется с 1992 года в качестве «золотого стандарта» при лечении мужской стерильности и характеризуется высокой эффективностью.

Суть данного метода состоит в инъицировании сперматозоида непосредственно в яйцеклетку, с целью оплодотворить ее. Благодаря интрацитоплазматической инъекции сперматозоида процент оплодотворения превышает 70 % даже при очень низком качестве спермы.

Пациенты, в эякуляте которых не обнаружены подвижные и жизнеспособные сперматозоиды, могут воспользоваться методикой ИКСИ. Если в результате заболеваний семявыносящих путей в семенной жидкости мужчины отсутствуют спермии, они добываются из тканей яичка (ТЕЗЕ / ТЕЗА )либо из его придатков (техника ПЕЗА / МЕЗА).

По эффективности и процентным показателям методика ИКСИ сравнима с классической методикой искусственного оплодотворения - ЭКО.

5. ИМСИ

Оболочка яйцеклетки выполняет так называемую функцию селективного биологического барьера и препятствует проникновению дефектных и неполноценных сперматозоидов. Таким образом, я йцеклетку способны оплодотворить лишь качественные сперматозоиды.

Способ ИКСИ позволяет обойти этот естественный механизм селекции. В таком случае выбор наиболее качественного сперматозоида осуществляется специалистами-биологами, которые крайне основательно изучают все морфологические характеристики семенных клеток (под микроскопом с цифровым увеличением до 200-400 раз).

Качество субъективной морфологической оценки и отбора сперматозоидов может быть значительно увеличено благодаря внедрению новейших и современных микроскопических техник с высоким разрешением, для обозначения которых принято использовать термин «ИМСИ» - интрацитоплазматическая морфологическая селекционная инъекция сперматозоида.

Как показывают результаты проведенных нами исследований, вероятность отбора сперматозоида с более лучшей морфологией и оплодотворяющей способностью, а также изолирование семенных клеток с вакуолем (дефектом в головке сперматозоида) с применением метода ИМСИ существенно выше нежели при методике ИКСИ.

Спермии, имеющие большие вакуоли (> 4% всей площади головки сперматозоида) оказывают негативное воздействие на развитие эмбриона, именно поэтому отбор качественного сперматозоида важен для выполнения процедуры искусственного оплодотворения.

6. Специальные техники

6.1. Технология IVM (In Vitro Maturation)

In vitro Maturation (IVM) - это одна из современных технологий репродуктивной медицины, к которой в основном прибегают в том случае, если по тем или иным соображениям женщине противопоказана классическая гормональная стимуляция перед ЭКО, ИКСИ и ИМСИ. Яйцеклектки извлекаются из фолликулов в незрелом виде и помещаются на дозревание в специальную лабораторную среду.

В наших центрах репродукции человека и планировании семьи техника IVM проводится на высоком уровне профессионализма и с соблюдением всех международных стандартов.

Показания к проведению IVM:

• Высокий риск развития синдрома гиперстимуляции у пациенток с поликистозными яичниками. В настоящее время разработаны новые методики стимуляции фолликулов и целенаправленные терапевтические стратегии, позволяющие минимизировать риск развития синдрома гиперстимуляции и прибегать к технике IVM лишь в крайне редких ситуациях
• Пациентки, которым предстоит пройти курс химиотерапии - в связи с этим стимуляция роста фолликулов невозможна либо она способна привести к осложнениям

Недостатки метода IVM:

• Созревание небольшого числа яйцеклеток в пробирке
• Возможное возникновение негативных последствий в процессе развития эмбриона
• Согласно результатам исследований, около 80 % всех эмбрионов, развившихся из таких яйцеклеток имеют хромосомные нарушения

6.2. Анализ веретена

Веретено имеет важное значение в мейотическом созревании человеческих яйцеклеток и отвечает за правильное расположение и равномерное деление хромосом во время деления клеток.

У 15-20% процентов всех неоплодотворенных яйцеклеток веретено отсутствует. Наряду с первым полярным тельцем наличие веретена является главным показателем зрелости и полноценности яйцеклетки.

Чем старше возраст женщины, тем чаще наблюдаются случаи нарушения формирования веретена. Отсутствие веретена обычно ведет к снижению шансов на оплодотворение, а также препятствует развитию эмбриона.

Расположение веретена оказывает влияние на развитие эмбриона. Как правило, яйцеклетка ориентирована таким образом, чтобы первое полярное тельце находилось по соседству с 12-ой хромосомой человека. Инъекция сперматозоида в яйцеклетку происходит рядом с 3-ей хромосомой.

Если веретено яйцеклетки расположено неправильно (зачастую оно бывает локализовано вблизи первого полярного тельца), то при введении сперматозоида возникает опасность, что стеклянный капилляр может задеть веретено, и как следствие, привести к гибели яйцеклетки.

Анализ веретена применяется в целях определении причины неудачных попыток искусственного оплодотворения.

6.3. Преимплантационная диагностика

Предимплантационная диагностика (ПИД) или, как она по-другому обозначается в англоамериканских странах, предимплантационная генетическая диагностика (ПГД), была изначально разработана в качестве альтернативного варианта пренатальной диагностики. В то время, как выполнение пренатальной диагностики возможно лишь с наступлением беременности, предимплантационная диагностика способна определить хромосомные аномалии эмбриона до момента их переноса в полость матки.

ПИД, или предимплантационная генетическая диагностика, помогает с большой точностью исследовать отдельные клетки на наличие анеуплоидии (изменение нормального числа хромосом в клетках) и генетических заболеваний (например, ретинобластомы - злокачественной опухоли оптической части сетчатой оболочки глаза). Проведение предимплантационной диагностики стало возможным благодаря развитию таких эффективных методик исследования генетической структуры, как полимеразная цепная реакция (ПЦР) и флюоресцентная гибридизация in situ (FISH).

Предимплантационная генетическая диагностика применяется для проведения так называемого HLA-типирования эмбриона, которое выполняется с целью подбора донора идентичному по лейкоцитарному антигену, чтобы спасти больного брата или сестру новорожденного (при анемии фанкони, лейкемии, аутоиммунных заболеваниях и т.д.).

6.4. Диагностика полярного тела

Диагностика полярного тела (ДПТ) - это способ анализа генетического материала материнских ооцитов, направленный на выявление случаев неправильного распределения хромосом в яйцеклетке и предрасположенности к определенным наследственным заболеваниям.

Использование техники диагностики полярного тела позволяет значительно снизить процент выкидышей и повысить шансы на наступление беременности. Более подробную информацию о данной методике мы предоставим Вам во время личной консультации.

6.5. Диагностика бластомера на 3 день развития эмбриона

Биопсия с целью изъятия 1 или 2 клеток (бластомеров) из развивающегося эмбриона осуществляется обычно на 3 день после оплодотворения, на 6-8-клеточной стадии.

Основным показанием к выполнению данного диагностического исследования служит наличие в семейном анамнезе случаев наследственных заболеваний. В ходе процедуры проводится целенаправленное изучение генетической структуры эмбриона, чтобы определить, не является ли он носителем наследственных заболеваний. Для трансфера отбираются лишь те эмбрионы, у которых не были выявлены генетические дефекты и аномалии.

Диагностика бластомера служит для исследования хромосомных нарушений эмбриона (анеуплоидии, реципрокные транслокации - межхромосомные перестройки). Например, для скрининга анеуплоидии данную методику принято считать «золотым стандартом».

6.6. Биопсия трофэктодермы - диагностика бластоцистов

Биопсия трофэктодермы - это анализ клеток бластоцистов, выполняемый на 5 день их развития. На сегодняшний день сотрудники нашего центра репродукции человека и планирования семьи, совместно с профессором Аланом Хендисайдом (разработчик универсального генетического теста - предимплантационной генетической диагностики), работают над дальнейшим усовершенствованием этой методики.

Мы стремимся к тому, чтобы в будущем иметь возможность предложить нашим пациентам проведение диагностики хромосомных нарушений (анеуплодии) и генетических заболеваний с помощью одной единственной процедуры.

Выполнение диагностики бластоцистов требует наличия оптимальных техник заморозки, поскольку процесс их анализа зачастую длится дольше, чем период культивирования эмбриона. Мы гордимся тем, что в состав нашего коллектива входит доктор Pierre Vanderzwalmen, один из признанных мировых экспертов по криоконсервации. Таким образом, мы можем обеспечить стабильность и эффективность осуществления подобной процедуры.

6.7. Ассистированный хетчинг - надсечение оболочки эмбриона

Ассистированный хетчинг - это процедура, производимая с целью упрощения выхода эмбриона из блестящей оболочки яйцеклетки, плотность которой изменяется с помощью использования механического, химического рассечения или лазерной насечки.

Применение ассистированного хетчинга является наиболее целесообразным в том случае, когда оболочка яйцеклетки (зона пеллюцида) слишком плотная и толстая и не позволяет эмбриону пробить ее и выйти наружу. Определить степень плотности зоны пеллюцида можно с помощью поляризационной микроскопии или обычного светового микроскопа.

На увеличение плотности блестящей оболочки яйцеклетки влияют следующие факторы:

• возраст женщины - чем старше пациентка, тем плотнее и тверже блестящая оболочка яйцеклетки
• криоконсервация и повторная разморозка эмбрионов

Техника ассистированного хетчинга применяется в наших центрах репродукции человека и планирования семьи в зависимости от индивидуальных показаний.

6.8.ПИКСИ

ПИКСИ - это специальная микроманипуляционная методика в рамках ИКСИ и ИМСИ, осуществляемая с целью отбора зрелых и качественных сперматозоидов с учетом их морфологии и жизнеспособности.

На головке здоровых и полноценных сперматозоидов расположены специфические рецепторы гиалуроновой кислоты (гиалуроната).

Гиалуронат является одним из главнейших компонентов, присутствующих в оболочке яйцеклетки. Незрелые сперматозоиды не содержат рецепторов гиалуроновой кислоты, в связи чем они неспособны к оплодотворению.

Для проведения так называемого НВА–теста связывания сперматозоидов с гиалуроновой кислотой, основанного на оценке степени зрелости семенных клеток, используется гиалуронат, позволяющий отсортировать спермии с высоким оплодотворяющим потенциалом. Сперматозоиды, способные связываться с гиалуронатом, в дальнейшим применяются для проведения процедур ИКСИ и ИМСИ.

Технология ПИКСИ применяется лишь по определенным показаниям и является методикой, используемой в качестве дополнительной манипуляции к ИМСИ.

6.9.Поляризационная микроскопия

Оболочка яйцеклетки (зона пеллюцида), сформированная тремя слоями гликопротеина, окружает оплодотвоенную яйцеклетку до тех пор, пока эмбрион не пробьется через нее. Как правило, это происходит на 5-6 день эмбриогенеза в стадии бластоцистов.

Степень плотности всех трех слоев оболочки яйцеклетки удается определить с помощью поляризационного микроскопа. Анализ полученных в ходе исследования результатов позволяет предпринять меры, способствующие улучшению качества зоны пеллюцида яйцеклетки (или эмбриона).

Внутренний слой зоны пеллюцида является важнейшим неинвазивным индикатором потенциала развития яйцеклетки. У пациенток старше 35 лет внутренний оболочки яйцеклетки характеризуется повышенной плотностью и меньшей упорядоченностью гликопротеинов.

7. Криоконсервация- глубокая заморозка

Заморозка и хранение биологического материала осуществляется в условиях очень низких температур, создающихся с помощью жидкого азота (-196°C). Поскольку низкие температуры замедляют протекание биологических процессов, то в замороженном (криоконсервированном) состоянии человеческие клетки могут храниться в течении достачно долгого времени, не теряя при этом свои функции и жизнеспособность.

Для заморозки клеток и тканей в наших центрах репродукции человека и планирования семьи внедрены специальные способы криоконсервирования, помогающие сохранить клетки без повреждения их генома.

7.1. Криоконсервация сперматозоидов и тканей яичка

Спермии, добытые из семенной жидкости, эякулята, непосредственно из тканей яичка или из его придатков, могут заморожены путем криоконсервации для отсроченного использования.

Пациентам, страдающим злокачественными опухолевыми заболеваниями, перед прохождением химитерапии и радиотерапевтического лечения целесообразно сдать сперму для криоконсвервации семенных клеток, поскольку данные виды лечения могут поразить ткани яичка и привести к нарушению его функциональности. Замороженные сперматозоиды могут быть применены при возникновении у мужчины желания иметь собственных детей в перспективе.

Согласно результатам научных исследований, криоконсервированные семенные клетки могут храниться более 30 лет. Следует отметить, что криоконсервация не ухудшает качественные показатели сперматозоидов.

Донорская сперма может быть также заморожена и сдана на хранение в криобанк. По истечении 6 месяцев после криоконсервирования донор дополнительно проверяется на наличие определенных инфекционных заболеваний согласно всем правовым предписаниям. Использование спермы донора для последующего оплодотворения разрешается лишь при отсутствии инфекционных заболеваний.

7.2. Заморозка неоплодотворенных яйцеклеток

В связи с интенсивным развитием современного общества в настоящее время в мире наблюдается тенденция к откладыванию планирования беременности на более позднее время. Все больше растет количество женщин, решающихся завести детей после 35 лет.

В связи с тем неоспоримым биологическим фактом, что по мере старения женщины качество и количество яйцеклеток в организме значительно снижается, и шансы забеременеть после 38 лет весьма невелики, то женщине, желающей осуществить зачатие позже, рекомендуется заморозить яйцеклетки в профилактических целях в раннем репродуктивном возрасте (20-35 лет).

Метафаза II - яйцеклетка

Таким образом, у женщине появляются оптимальные шансы на успешную беременность даже в более позднем возрасте - 40-45 лет.

В нашем центре репродукции человека и планирования семьи используются самые современные способы замораживания неоплодотворенных яйцеклеток и новейшее техническое оснащение, что обеспечивает высокий уровень проведения процедуры.

7.3. Криоконсервация оплодотворенных яйцеклеток

Наши специалисты с высоким успехом осуществляют и заморозку оплодотворенных яйцеклеток в стадии пронуклеуса (зигота), на 1-е сутки развития. В распоряжении клиники имеется богатое техническое оснащение, что позволяет гарантировать высокие процентные показатели качества оплодотворенной яйцеклетки после ее размораживания и ее способности к развитию до стадии бластоцистов (95 %).

7.4. Криоконсервация эмбрионов

Эмбрионы могут быть подвержены заморозке на любой стадии развития (2-6 день). Опытные специалисты наших центров репродукции человека и ЭКО в совершенстве владеют как методиками медленной заморозки, так и витрификации (быстрая заморозка с использованием жидкого азота). Показатели сохранения качества эмбрионов и их жизенеспособности составляют 90%.

Неиспользованные в ходе протокола искусственного оплодотворения эмбрионы могут быть криоконсервированы и применены через более поздний промежуток времени.

Криоконсервация в нашей клинике проводится следующими способами:

• Медленное замораживание / медленное размораживание (с целью предотвращения образования льда применяется методика Seeding - сидинг).
• Витрификация/ стеклование (переход жидкого вещества в твердое состояние без образования кристаллов).

7.5. Криоконсервация тканей яичника

Ткани яичника рекомендуется замораживать в том случае, если имеется опасность поражения яичников вследствие какого-либо тяжелого серьезного заболевания, а беременность еще не наступила или ее наступление крайне затруднительно.

Женщины в возрасте 20-35 лет, которые не нашли подходящего партнера для рождения ребенка, или решили отложить наступление беременности на более поздние сроки по профессиональным соображениям, могут также обратиться в наш центр для сдачи биологического материала, яйцеклеток или тканей яичника, которые будут применены в будущем для зачатия.

Центр ЭКО Проф. Цеха в Брегенце

Römerstrasse 2
6900 г.Брегенц Австрия